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RNA实验操作

RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存

密码子图书馆 2021-10-03 09:57:56RNA实验操作
在脊椎动物中,外周血一直被认为是侵害性较小、富有价值的检测样本。在许多生物样本库中,由于血液样本的常规收集、处理及保存方法简便、成本低且富含可利用成分和生物分子,因此是进行多种项目分析的理想实验材料。然鹅,科研僧们历经千辛万苦最后发现获得的血液样本R

在脊椎动物中,外周血一直被认为是侵害性较小、富有价值的检测样本。在许多生物样本库中,由于血液样本的常规收集、处理及保存方法简便、成本低且富含可利用成分和生物分子,因此是进行多项目分析的理想实验材料。然鹅,科研僧们历经千辛万苦最后发现获得的血液样本RNA降解了。。。。额,这就很惆怅了。

所以呢,在样本集、处理及储存过程中必须格外注意,从根本上确保获得高质量的RNA。

今天小编和大家一起来聊一聊在进行RNA实验时血液样本如何进行收集与保存。

血液的组成

首先来熟悉一下血液的组成。

人类的血液由血浆和血细胞组成。其中血浆约占血液的55%,是水,糖,脂肪,蛋白质,钾盐和钙盐等混合物。血细胞约占血液的45%,主要分为红细胞、白细胞和血小板。而哺乳动物成熟的红细胞和血小板是无核的。

RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图1)

血浆和血清

血浆是离开血管的全血经抗凝处理后,通过离心沉淀,所获得的不含细胞成分的液体,其中含有纤维蛋白原,不含游离的Ca2+ ,若向血浆中加入Ca2+,血浆会发生再凝固。

血清是离体的血液凝固之后,经血凝块聚缩释出的液体,其中已无纤维蛋白原,但含有游离的Ca2+,血清中少了很多的凝血因子但多了很多的凝血产物。

RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图2)

采血管的选择

采血管,大家都不陌生,去医院抽个血,一定会用到采血管,那么问题来鸟,这么多颜色的采血管,有什么区别呢?下面小编来给大家介绍一下采血管的分类及不同颜色试管帽代表的含义。

RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图3)

1.蓝色头盖管(含有柠檬酸钠抗凝剂的采血管)

2.黑色头盖管(含有 0.109mol/L 柠檬酸钠)

3.紫色头盖管(含有乙二胺四乙酸以及其盐的采血管)

4.绿色头盖管(肝素抗凝管)

5.灰色头盖管(含有草酸钾/氟化钠)

6.橘红色头盖管(促凝管)

7.金黄色头盖管(含有惰性分离胶及促凝剂的采血管)

8.红色头盖管(无添加剂的干燥真空管)

 

抗凝剂有很多种,原理包括螯合钙、抑制蛋白酶和抑制血小板活化等。虽然有这么多抗凝剂可供选择,但不建议使用肝素抗凝剂,因为肝素会同引物和酶竞争性结合核酸,影响后续的实验结果。所以对于血清样本,采血管推荐使用黄盖采血管(促凝管或促凝管带分离胶)。血浆样本,采血管推荐使用紫盖采血管(EDTA-K2 或 EDTA-K3)。

血液总RNA的提取

目前对血液总RNA的提取,前期处理主要分为红细胞裂解法及淋巴细胞分离法。两种方法各有优缺点。RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图4)

由于红细胞裂解法操作简单,能获得几乎所有白细胞的RNA,因此这种方法被广泛使用。对于血液RNA的抽提,除了采用传统Trizol进行抽提之外,市面上也涌现出各式各样的试剂盒,如何在众多的试剂盒中挑选出最适合自己的一款,也需要考验眼力哦!

今天小编给大家推荐一款比较好用的血液RNA提取试剂---TRIzol® LS Reagent,比TRIzol还要好用哦!!!(并不是托,亲测,好用。。。。)

RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图5)

如何进行取样?

全血样本取样方法
RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图6)


全血样本

为尽可能缩短取样时间,保证RNA质量,建议使用抗凝采血管(不建议使用肝素抗凝管)采集全血。采血后轻轻倒转采血管混合4~5次,使抗凝剂与血液混匀。将采集好的全血快速转移至单独的冻存管或离心管,按照每250ul/管分装,加750ul(即三倍体积)的Trizol LS,混匀。液氮速冻后,放-80 °C冰箱保存。长期保存,可放入液氮。每个环节尽可能的快速完成,避免RNA的降解。

每个环节尽可能的快速完成,避免RNA的降解。

还需要小伙伴们注意的是,保存全血所使用的冻存管或离心管,操作中使用的枪头盒离心管等均需要RNase-free哒,装好样品后管口需要以封口膜封好,防止污染,分装好的样本做好标记,避免混淆。

血清样本取样方法


血清样本

采用快速分离法

建议使用橘黄色促凝采血管(可在5min内使采集的血液凝固,适用于急诊血清系列生化试验)采集全血,采血后轻轻倒转采血管混合4~5次,使促凝剂与血液混匀。直立置于4℃待血液完全凝固,1000g离心10分钟,分离血清。将采集的血清转移至单独的冻存管或离心管,按照每250μl/管分装。液氮速冻后,放-80℃冰箱保存。长期保存,可放入液氮。

RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存(图7)

黄盖采血管(促凝管或促凝管带分离胶)