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蛋白质实验操作

  • ELISA实验步骤及所需试剂耗材

    ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(  Enzyme-Linked  Immunosorbnent  Assay  )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用...

  • 蛋白质稳定性的保持

    蛋白质稳定性的保持

    本篇内容为阅读《蛋白质纯化指南》(第二版)(陈薇主译) "第10章 蛋白质稳定性的保持"所作的读书笔记。【摘要】纯化过程中需要非常谨慎地保持目标蛋白质的完整和充足的活性。本章重点阐述在纯化和储存过程中保持蛋白质稳定所要牢...

  • 蛋白质浓缩和溶质的去除

    蛋白质浓缩和溶质的去除

    本篇内容为阅读《蛋白质纯化指南》(第二版)(陈薇主译) "第9章 蛋白质浓缩和溶质的去除"所作的读书笔记。【摘要】现有多种用于去除溶剂的方法,包括冻干、反向萃取、溶质析出、透析、超滤和层析技术。小型化和高通量的蛋白质分析...

  • 如何愉快地进行蛋白的共表达?

    如何愉快地进行蛋白的共表达?

    不少小伙伴都需要在同一个宿主(大肠杆菌或动物细胞等)进行多个外源基因同时表达。此时,有几个不同的策略: 1. 分别将基因构建到多个载体中,共转到同一个宿主,分别进行表达。这种构建模式是有的,但是经常用于一些特定的应用,比如某些Cas9基因编...

  • Western Blot样品制备和蛋白表达检测注意事项

    Western Blot样品制备和蛋白表达检测注意事项

    Western Blot是分子生物学和蛋白质组学中最常用的技术之一。但Western Blot是一个多步骤的操作流程,因此任何一个步骤发生错误,都会导致最终的结果发生变异,从而降低了该技术的可靠性和可重复性。有研究表明,Western B

    Western Blot
  • 蛋白质组学概念的起源和发展

    蛋白质组学概念的起源和发展

    蛋白质组学的诞生和发展,离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括(但不限于)基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来,分子医学、大数据技术和人工智能的发展,进一步加速推动...

  • 免疫荧光双标实验操作方法与注意事项

    在同一组织细胞标本上需要同时检测两种抗原时,需进行双重荧光染色。双重免疫荧光标记法(double immunofluorescence labeling method)也分为直接法和间接法。(1)直接法双重免疫荧光标记:将标记有两种不同荧光...

  • 导师再也不用担心我的IP / Co-IP的条带了

    导师再也不用担心我的IP / Co-IP的条带了

    IP实验分成两个部分(免疫沉淀IP+WB)。 免疫沉淀(IP)部分:在含A蛋白细胞裂解液中加入A蛋白抗体(IP抗体),再加入琼脂糖珠/磁珠,形成“A蛋白+IP抗体+磁珠/琼脂糖珠”复合物,通过离心沉淀或使用磁力架吸附,把复合物提取出来。 W...

  • 常见的三种蛋白定量法原理与特点

    蛋白质作为生命活动的物质基础之一,也是生命活动的主要承担者,是科研工作中的重要研究对象。而在这些精细化研究工作中,测定蛋白浓度,定量实验,是探索蛋白生物学功能不可或缺的一个环节。依托不同的科学原理,目前已经发展出多种不同的蛋白测定方法,其中...

  • Western Blot 实验常见问题

    Western Blot 实验常见问题

    作为WB的新手或老手,可能已经对WB实验要点了然于胸,例如,需使用新鲜样本,根据蛋白分子量选择合适孔径的转印膜,根据抗体选择适当的稀释液,根据ECL液灵敏度调整二抗稀释度等等。但是,作为细节决定成败的实验,仍有几个极易被忽视的细节和问题。接...