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RNA实验操作

  • RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存

    RNA制备实用帖|血液样本的采集与保存

    在脊椎动物中,外周血一直被认为是侵害性较小、富有价值的检测样本。在许多生物样本库中,由于血液样本的常规收集、处理及保存方法简便、成本低且富含可利用成分和生物分子,因此是进行多种项目分析的理想实验材料。然鹅,科研僧们历经千辛万苦最后发现获得的...

  • qRT-PCR相对定量计算详解

    qRT-PCR相对定量计算详解

    做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本的表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基...

    qPCR
  • Hortic Res | 逐步优化实时 RT-PCR 分析的优化方案

    Hortic Res | 逐步优化实时 RT-PCR 分析的优化方案

    查看原文   查看PDF『点击免费订阅《园艺研究》电子刊』实时荧光定量PCR(qPCR)是一种重要的分析基因表达水平的方法。该方法的准确性依赖于引物的特异性、扩增条件的优化和内参基因的稳定性。目前,引物设计主要考虑的是引物靶向特异性、引物G...

  • 文献分享 | RNA时间戳:敢问RNA芳龄几何?

    文献分享 | RNA时间戳:敢问RNA芳龄几何?

    “正因为你为你的玫瑰花费了时间,才使你的玫瑰变得如此重要。”——《小王子》人们常用“时间”这一标尺来衡量价值。对于个体生命而言,时间是有限而珍贵的。我们用“年龄”来度量生命存续的时间,作为追溯生命诞生的标记,也作为生命如影随形的“标签”。在...

  • qPCR之SYBR染料法详解

    qPCR之SYBR染料法详解

    实时荧光定量PCR(qPCR)通过仪器实时检测反应体系中的荧光值变化,能够准确体现出模板中相应基因的相对表达量变化,成为生命科学领域一项非常重要且常规的技术。这项技术不仅能够检测不同样本中相应的基因表达量,并且被广泛应用于临床疾病诊断、食品...

    qPCR
  • 【分子生物学】常用的内参基因及其使用范围

    【分子生物学】常用的内参基因及其使用范围

    包括GAPDH 、β- actin(BETA-actin) 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。1,在血清刺激条件下的基因表达定量研究中, B 22MG 和 18SrRNA 作为内参基...

    内参基因
  • 提取的RNA总降解?请看这里!

    RNA提取的“四大纪律八项注意”01纪律一:样品采集后迅速液氮冷冻并于-80℃冰箱保存02纪律二:杜绝外源性RNA酶的污染注意1:操作人员严格戴好口罩,手套,实验过程中手套要勤更换注意2:认真处理实验所涉及到的试剂、耗材RNA提取必须在无R...

  • 单细胞RNA测序,众多研究都pick它

    单细胞RNA测序,众多研究都pick它

    多细胞测序和单细胞测序,你pick谁?如今,大多数研究人员也许会选择后者,因为不一样的角度,会带来不一样的见解。单细胞测序的最初动力来自癌症研究,可帮助人们了解肿瘤异质性和肿瘤微环境。它还有助于我们了解其他的复杂生物系统,比如中枢神经系统和...

  • 细胞/组织总RNA的提取(TRIZOL法)

    细胞/组织总RNA的提取(TRIZOL法)

    细胞/组织总RNA的提取(TRIZOL法) 预处理提前将提取RNA的EP管、枪头等耗材用DEPC水浸泡处理后灭菌烘干(或高温灭菌后60烘箱烘干两个月)备用;将收集的细胞沉淀迅速放置于冰上,移至杂交房;(细胞)按50-100mg组织加入1ml...

  • 总RNA的提取(QIGEN试剂盒 含翻译)

    Notes before starting: A. If purifying RNA from cell lines rich in RNases, or tissue, add either 10µl β-mercaptoethanol(...

  • 提取RNA需要注意哪些问题?

    RNA比DNA更容易降解,除了因为无处不在的RNA酶之外,也与自身结构有关,今天我就结合自己在操作,分享一些我个人的见解和总结,干货不赘述。主要从以下四个方面说明:材料实验材料要尽可能新鲜,能够用新鲜的实验材料提取RNA是最好不过的了,可是...

  • qPCR常见问题及解决方案

    qPCR常见问题及解决方案

    在RT-qPCR的实验过程中,大家或多或少都会遇到扩增曲线异常、熔解曲线异常、重复性差等问题。小翊给大家整理了SYBR Green染料法的常见问题及解决方案,以供大家参考。Part 1 扩增曲线异常正常的扩增曲线一般呈S型,Ct值最好在20...

    qPCR